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ELISA實(shí)驗(yàn)關(guān)鍵注意要點(diǎn)！
上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司成立于2010年12月，集研發(fā)、生產(chǎn)、銷售為一體，以科研試劑生產(chǎn)、診斷試劑原料供應(yīng)生產(chǎn)為核心，致力于為全球來自高等院校、科研機(jī)構(gòu)、診斷試劑生產(chǎn)廠家以及生物制藥公司的廣大客戶們提供高質(zhì)量生物產(chǎn)品。恒遠(yuǎn)生物現(xiàn)擁有各物種基因產(chǎn)品50余萬種；重組蛋白20余萬種；數(shù)十個(gè)種屬的多克隆抗體3萬多種和高質(zhì)量單克隆抗體數(shù)百種。恒遠(yuǎn)品牌自主研發(fā)ELISA試劑盒，現(xiàn)已涵蓋20多個(gè)種屬，數(shù)千種產(chǎn)品，涉及腫瘤、激素、自身免疫、心血管、代謝等十多個(gè)研究領(lǐng)域。恒遠(yuǎn)生物為大家總結(jié)，ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)時(shí)至關(guān)重要的步驟有：
一、重要的洗滌：
不充分的洗滌會(huì)導(dǎo)致差異和高背景，從而帶來不理想的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。如果未結(jié)合的材料殘留在微孔板中，那么它會(huì)增加背景噪音。有必要的話，可增加洗滌液中的鹽濃度，這會(huì)阻止非特異結(jié)合反應(yīng)。如果背景過高，懷疑洗滌不夠時(shí)，可以嘗試增加洗滌次數(shù)。
二、關(guān)鍵的封閉：
封閉液的作用是讓不相關(guān)的蛋白占據(jù)微孔板中潛在的結(jié)合位點(diǎn)。這就降低了可產(chǎn)生信號(hào)的抗體非特異結(jié)合的機(jī)會(huì)。如果背景過高，懷疑封閉不充分，那么可以嘗試使用更高濃度的封閉液，或適當(dāng)延長(zhǎng)封閉時(shí)間。目前主要有兩種類型的封閉液：蛋白和非離子型去污劑。使用的類型須取決于多個(gè)因素，包括微孔板的表面試劑、吸附的抗原、抗體和檢測(cè)試劑。好的封閉液應(yīng)降低非特異性結(jié)合，但它不應(yīng)當(dāng)與抗原、抗體或檢測(cè)試劑發(fā)生相互作用。
三、抗體濃度須優(yōu)化：
如果試劑稍有不同，則可能需要優(yōu)化抗體的量。非特異的抗體結(jié)合會(huì)增加背景。為了防止這一點(diǎn)，切勿使用過多的一抗或二抗。
四、檢測(cè)試劑要適量：
切勿使用過多的檢測(cè)試劑。如果濃度過高，或者未正確稀釋，則會(huì)導(dǎo)致高背景。ELISA試劑盒也不要顯色過度，如有必要，優(yōu)化一下何時(shí)應(yīng)加入終止液。只有確保每一步操作都做到位，才會(huì)呈現(xiàn)完美的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。所以ELISA實(shí)驗(yàn)的每一步都很重要，不可以掉以輕心。
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