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恒遠(yuǎn)生物|大鼠胚胎心肌細(xì)胞H9c2(2-1)培養(yǎng)攻略
品牌: 恒遠(yuǎn)生物
貨號(hào): HYCC30031
中文名稱(chēng): 大鼠胚胎心肌細(xì)胞
規(guī)格: T25
形態(tài)特性: 上皮樣細(xì)胞生長(zhǎng)
生長(zhǎng)特性: 貼壁生長(zhǎng)
培養(yǎng)條件:DMEM+10%FBS
傳代方法: 1:2~1:6傳代；2~3天換液1次。
凍存條件: 無(wú)血清細(xì)胞凍存液
特征特性：該細(xì)胞由Kimes B和Brandt B從BD1X大鼠胚胎心臟組織的克隆細(xì)胞株亞克隆得到；表現(xiàn)出許多骨骼肌的特性。這個(gè)細(xì)胞株中的成肌細(xì)胞能融合形成多核的肌管，并對(duì)乙酰膽堿的刺激發(fā)生反應(yīng)。如果培養(yǎng)基中的血清濃度下降到1%，融合很快發(fā)生。
一、細(xì)胞收到后處理
細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿完全培養(yǎng)液并封好瓶口是細(xì)胞運(yùn)輸?shù)某Ｒ?jiàn)辦法。收到細(xì)胞回到自己的實(shí)驗(yàn)室后，先打開(kāi)外包裝，用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超凈臺(tái)內(nèi)，嚴(yán)格無(wú)菌操作，培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)。鏡下觀察：未超過(guò)80%匯合度時(shí)，可將瓶裝的完全培養(yǎng)液收集至離心管中，加入6ml完全培養(yǎng)基，放入37℃、孵箱培養(yǎng)；超過(guò)80%匯合度時(shí)，根據(jù)情況傳代或者凍存，具體操作見(jiàn)細(xì)胞培養(yǎng)步驟。（注意發(fā)貨的是密封培養(yǎng)瓶的話，處理完后放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)記得培養(yǎng)瓶蓋子擰松，傳代后建議一瓶用原瓶里面的完全培養(yǎng)基，另外一瓶用自己配的完全培養(yǎng)基），若是5%CO2的培養(yǎng)箱，可用密封培養(yǎng)瓶，擰緊瓶蓋后放入5%CO2培養(yǎng)箱，48H內(nèi)要換液一次。
二、細(xì)胞培養(yǎng)步驟
1.培養(yǎng)皿/瓶用槍頭或移液管吸去原培養(yǎng)液。
2.無(wú)菌PBS或無(wú)菌生理鹽水洗滌3次（按培養(yǎng)體積加入）。
3.加入適量胰酶消化適當(dāng)時(shí)間（一般胰酶為0.25%；9cm/10cm培養(yǎng)皿和25cm培養(yǎng)瓶，一次加入1mL胰酶。消化時(shí)間視細(xì)胞類(lèi)型等多種情況綜合考慮，一般如果是細(xì)胞株，非原代培養(yǎng)，消化1－2分鐘足矣）。
4.用槍頭吹打數(shù)十次（視細(xì)胞類(lèi)型而定。一般細(xì)胞株30－50次吧，耗時(shí)一般2分鐘左右）。
5. 加入適量體積完全培養(yǎng)基終止胰酶消化（如果是9cm/10cm培養(yǎng)皿和25cm培養(yǎng)瓶，可以加入1mL完全培養(yǎng)基；現(xiàn)在培養(yǎng)瓶（皿）里有2mL溶液）。
6.現(xiàn)在可以將溶液進(jìn)行分瓶（2mL）。如果是細(xì)胞株，直接均分到兩個(gè)培養(yǎng)瓶（皿）里。如果是原代培養(yǎng)，可以根據(jù)消化時(shí)間來(lái)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行分離；因此可以將溶液（2mL）都轉(zhuǎn)入新的培養(yǎng)瓶（皿）。
7.將兩個(gè)培養(yǎng)瓶（皿）補(bǔ)足完全培養(yǎng)基到正常體積（果是9cm/10cm培養(yǎng)皿和25cm培養(yǎng)瓶，為5mL完全培養(yǎng)液）。
8.鏡下觀察。剛剛傳代細(xì)胞還沒(méi)貼壁，懸浮在溶液中，呈圓形。一般2h之內(nèi)會(huì)貼壁，如果已經(jīng)貼壁，根據(jù)細(xì)胞類(lèi)型有不同的形態(tài)，但通常都不是圓形。
9.鏡下觀察無(wú)誤之后，再放入細(xì)胞培養(yǎng)箱。培養(yǎng)瓶（皿）放入之前，可以用消毒酒精先擦一下。
10.傳代之后，最好第二天細(xì)胞換液一次。當(dāng)然，也可以視情況而定。
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