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還原糖含量試劑盒-可...

生化試劑盒

還原糖含量試劑盒-可見分光光度法

測(cè)定原理

加熱促進(jìn)堿性溶液中3,5-二硝基水楊酸溶液與還原糖生成棕紅色氨基化合物,在540nm有特征吸收峰;在一定的濃度范圍內(nèi),還原糖含量與540nm吸光度成線性關(guān)系,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線,即可求出樣品中還原糖的量。

中文名稱 還原糖含量試劑盒
規(guī)格 48樣
貨號(hào)

E-316-SH

價(jià)格 ¥500
樣本類型 血清,血漿,組織勻漿,細(xì)胞裂解液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液等
檢測(cè)范圍 詳見說明書
檢測(cè)方法 可見分光光度法
貨期 3-5天
說明書 咨詢我司業(yè)務(wù)員獲取
文獻(xiàn) 咨詢我司業(yè)務(wù)員獲取

    正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

測(cè)定意義:

還原糖廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中。植物體內(nèi)的還原糖主要包括葡萄糖、果糖和麥芽糖等,是最常見的單糖和雙糖,其中葡萄糖和果糖不僅是呼吸作用的主要底物,也是進(jìn)一步合成蔗糖、淀粉和纖維素的底物。


測(cè)定原理

加熱促進(jìn)堿性溶液中3,5-二硝基水楊酸溶液與還原糖生成棕紅色氨基化合物,在540nm有特征吸收峰;在一定的濃度范圍內(nèi),還原糖含量與540nm吸光度成線性關(guān)系,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線,即可求出樣品中還原糖的量。


自備的儀器和用品:

可見分光光度計(jì)、水浴、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、蒸餾水。


試劑的組成和配制:

試劑一:100mL×1瓶,4℃保存;
試劑二:15mL×1 ,4℃保存;


樣品中還原糖的提取

1、細(xì)菌或細(xì)胞的處理:收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):試劑一體積(mL)為500~10001的比例(建議1000萬細(xì)菌或細(xì)胞加入2mL試劑一),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3S,間隔10S,重復(fù)30次),轉(zhuǎn)移到有蓋離心管中(防止加熱時(shí)水分散失),80℃水浴中40min并且振蕩8~10次,8000g25℃離心10min,取上清供測(cè)定用。

2、組織的處理:按照組織質(zhì)量(g:試劑一體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.2g組織,加入2mL試劑一),冰浴勻漿,轉(zhuǎn)移到有蓋離心管中(防止加熱時(shí)水分散失),80℃水浴中40min并且振蕩8~10次,8000g,25℃離心10min,取上清供測(cè)定用。

3、血清(漿)的處理按照血清(漿)體積(mL:試劑一體積(mL)15~10的比例(建議0.2mL血清(漿)加入2mL試劑一),冰浴勻漿,轉(zhuǎn)移到有蓋離心管中(防止加熱時(shí)水分散失),80℃水浴中40min并且振蕩8~10次,8000g,25℃離心10min,取上清供測(cè)定用。


測(cè)定步驟

1、 分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至540nm,蒸餾水調(diào)零。

2、 調(diào)節(jié)水浴鍋至95℃。

3、 EP管中加入下列試劑:

試劑(μL

對(duì)照管

測(cè)定管

樣本

700

700

試劑二

 

 500

蒸餾水

500

 

 

將各管搖勻,在95℃水浴中加熱5min(蓋緊,防止水分散失),取出后立即冷卻至室溫,混勻。在540nm波長(zhǎng)下讀取對(duì)照管和測(cè)定管吸光值。計(jì)算ΔA=A測(cè)定-A對(duì)照每個(gè)測(cè)定管需設(shè)一個(gè)對(duì)照管。

注意:如果ΔA大于2,需要將樣本用試劑一稀釋,計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)(若顯色后出現(xiàn)分層現(xiàn)象,可改用蒸餾水稀釋)。


還原糖含量計(jì)算:

1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定回歸方程為y = 8.3796x- 0.3034;x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(mg/mL),y為吸光值。

2、按樣本鮮重計(jì)算:

還原糖(μg/g鮮重)=[1000×(ΔA0.3034)÷ 8.3796×V1]÷(W×V1÷V2)=238.67×(ΔA0.3034)÷W

3、按樣本蛋白濃度計(jì)算:

還原糖(μg/mg prot)=[1000×(ΔA0.3034)÷ 8.3796×V1]÷(V1×Cpr)=119.34×(ΔA0.3034)÷Cpr

4、按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算:

還原糖(μg /104 cell)=[1000×(ΔA0.3034)÷ 8.3796×V1]÷1000×V1÷V2=0.239×(ΔA0.3034)

5、按血清(漿)體積計(jì)算:

還原糖(μg/mL)=[1000×(ΔA0.3034)÷ 8.3796×V1]÷V3×V1÷V2=1193.4×(ΔA0.3034) 

10001mg/mL=1000μg/mLV1:加入樣本體積,0.7mL;V2:加入提取液體積,2 mLV3:加入血清(漿體積),0.2mL;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣質(zhì)量,g;1000:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),1000萬。

注意:最低檢測(cè)限為1mg/g鮮重或10μg/mg prot




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