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生化試劑盒
- 醇?；D(zhuǎn)移酶（AAT）活性測定試劑盒-可見分光光度法
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恒遠(yuǎn)生物生化試劑盒應(yīng)用領(lǐng)域廣泛，涉及酶類、氧化應(yīng)激、鐵死亡、肝功能、腎功能、糖酵解、無機鹽離子、脂質(zhì)代謝、植物抗逆性等。檢測樣本類型豐富，涉及多種體液、組織、細(xì)胞、食品、植物、藥物、化妝品等。主要的檢測儀器為酶標(biāo)儀，分光光度計和熒光酶標(biāo)儀。我們將以高度的責(zé)任感和出色的產(chǎn)品質(zhì)量為客戶提供高效專業(yè)的生化代測服務(wù)和實驗技術(shù)解決方案。豐富的經(jīng)驗、優(yōu)良的品質(zhì)、充足的庫存、準(zhǔn)確的交貨時間、極具競爭力的價格，所有這些保證了我們向您提供的最專業(yè)最優(yōu)質(zhì)的服務(wù)。
| 中文名稱 |
醇?；D(zhuǎn)移酶（AAT）活性測定試劑盒 |
| 規(guī)格 | 24樣 |
| 貨號 |
L-770-SH |
| 價格 | ￥2000 |
| 樣本類型 | 血清，血漿，組織勻漿，細(xì)胞裂解液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液等 |
| 檢測范圍 | 詳見說明書 |
| 檢測方法 |
可見分光光度法 |
| 貨期 | 3-5天 |
| 說明書 | 咨詢我司業(yè)務(wù)員獲取 |
| 文獻(xiàn) | 咨詢我司業(yè)務(wù)員獲取 |
注 意：正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
測定意義：
AAT是一個多功能蛋白大家族，主要負(fù)責(zé)催化生物體內(nèi)各種酰基化和去?；磻?yīng)，在基因表達(dá)、代謝和信號傳導(dǎo)中具有重要作用。
測定原理：
AAT催化乙酰CoA轉(zhuǎn)移乙?；蕉〈迹?/span>釋放的CoA還原DTNB生成TNB；TNB在412nm有吸收峰，測定412 nm吸光度增加速率可計算AAT活性。
自備儀器和用品：
研缽、冰、臺式離心機、可見分光光度計、1mL玻璃比色皿、恒溫水浴鍋、無水乙醇。
試劑組成和配制：
提取液：液體25mL×1瓶，4℃保存；
試劑一：液體25mL×1瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×1瓶，-20℃保存。
試劑三：粉劑×1支，4℃避光保存。
粗酶液提?。?/span>
1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液）進(jìn)行冰浴勻漿。8000g，4℃離心10min，取上清置冰上待測。
2. 細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后8000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測。
3. 液體：直接檢測。
AAT測定操作：
1、分光光度計預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長到412 nm，蒸餾水調(diào)零。
2、工作液的配制：臨用前在試劑二瓶中加入22.5mL試劑一，充分混勻待用。用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
3、試劑三的配制：臨用前加無水乙醇1.25mL充分溶解待用，用不完的試劑4℃保存。
4、 空白管：在Ep管或96孔板中加入50μL提取液和900μL工作液，充分混勻，35℃反應(yīng)15min，加入50μL試劑三，充分混勻，25℃靜置10min，測定412nm處吸光值，記為A空白管。
5、 測定管：在Ep管或96孔板中加入50μL樣本和900μL工作液，充分混勻，35℃反應(yīng)15min，加入50μL試劑三，充分混勻，25℃靜置10min，測定412nm處吸光值，記為A測定管?！?/span>A=A測定管- A空白管，空白管只要做一管。
AAT活性計算公式：
（1）按照蛋白濃度計算
活性單位定義：每毫克蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1nmol TNB定義為一個酶活單位。
AAT (nmol/min /mg prot) = △A ÷（
×d）×V反總÷（V樣×Cpr）÷T = 98.04×△A÷Cpr
（2）按照樣本質(zhì)量計算
活性單位定義：每克組織每分鐘催化產(chǎn)生1nmol TNB定義為一個酶活單位。
AAT (nmol/min /g 鮮重) = △A ÷（
×d）×V反總÷(W×V樣÷V樣總) ÷T = 98.04×△A÷W
（3）按細(xì)胞數(shù)量計算
活性單位定義：每104個細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生1nmol TNB定義為一個酶活單位。
AAT (nmol/min /104cell) = △A ÷（
×d）×V反總÷(細(xì)胞數(shù)量×V樣÷V樣總) ÷T
= 98.04×△A÷ 細(xì)胞數(shù)量
（4）按液體體積計算
活性單位定義：每毫升樣品每分鐘催化產(chǎn)生1nmol TNB定義為一個酶活單位。
AAT (nmol/min /mL) = △A ÷（
×d）×V反總÷V樣÷T =98.04×△A
：TNB消光系數(shù)，13600L/mol/cm；V反總：反應(yīng)總體積，1mL；V樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積，0.05mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：蛋白含量，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時間，15 min。
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