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生化試劑盒
- 葡萄糖含量試劑盒-可見分光光度法
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測(cè)定原理:
葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸,并產(chǎn)生過(guò)氧化氫;過(guò)氧化物酶催化過(guò)氧化氫氧化4-氨基安替比林偶聯(lián)酚,生成有色化合物,在505 nm有特征吸收峰。
中文名稱 |
葡萄糖含量試劑盒 |
規(guī)格 | 48樣 |
貨號(hào) |
E-318-SH |
價(jià)格 | ¥700 |
樣本類型 | 血清,血漿,組織勻漿,細(xì)胞裂解液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液等 |
檢測(cè)范圍 | 詳見說(shuō)明書 |
檢測(cè)方法 |
可見分光光度法 |
貨期 | 3-5天 |
說(shuō)明書 | 咨詢我司業(yè)務(wù)員獲取 |
文獻(xiàn) |
咨詢我司業(yè)務(wù)員獲取 |
注 意 :正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義:
葡萄糖不僅是細(xì)胞能量代謝的主要底物,而且其代謝中間產(chǎn)物是生物合成的重要底物。植物可通過(guò)光合作用產(chǎn)生葡萄糖。就哺乳動(dòng)物而言,葡萄糖不僅是大腦神經(jīng)系統(tǒng)、肌肉、脂肪組織等的唯一能源,而且與還原性輔酶、乳糖和乳脂的合成密切相關(guān)。
測(cè)定原理:
葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸,并產(chǎn)生過(guò)氧化氫;過(guò)氧化物酶催化過(guò)氧化氫氧化4-氨基安替比林偶聯(lián)酚,生成有色化合物,在505 nm有特征吸收峰。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計(jì)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽和蒸餾水
試劑的組成和配制:
試劑一:0.5μmol/mL葡萄糖溶液10mL×1瓶,4℃保存;
試劑二:液體 25ml×1瓶,4℃保存;
試劑三:液體 25ml×1瓶,4℃保存;(若出現(xiàn)結(jié)冰現(xiàn)象,可37℃水浴溶解后使用)
葡萄糖提取:
1、組織的處理:按照組織質(zhì)量(g):蒸餾水體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL蒸餾水),研磨成勻漿,95℃水浴10分鐘(蓋緊,防止水分散失),冷卻后,8000g,25℃離心10min,取上清液備用。
2、細(xì)菌或細(xì)胞處理:收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):蒸餾水體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL蒸餾水),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3S,間隔10S,重復(fù)30次),95℃水浴10分鐘(蓋緊,防止水分散失),冷卻后,8000g,25℃離心10min,取上清液備用。
測(cè)定步驟:
1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至505nm,蒸餾水調(diào)零。
2、混合試劑的配制:使用前將試劑二和試劑三1:1等體積混合,用多少配多少。
3、加樣表(在EP管中加入下列試劑):
試劑(μL) |
空白管 |
標(biāo)準(zhǔn)管 |
測(cè)定管 |
樣本 |
|
|
100 |
試劑一 |
|
100 |
|
蒸餾水 |
100 |
|
|
混合試劑 |
900 |
900 |
900 |
混勻,置37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其它物種)水浴中,保溫15min,于505nm波長(zhǎng)處讀取吸光度。空白管、標(biāo)準(zhǔn)管和測(cè)定管吸光值分別記為A1、A2和A3。空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只要做一管。
葡萄糖含量計(jì)算:
1、按樣本蛋白濃度計(jì)算
葡萄糖含量(μmol/mg prot)=(C標(biāo)準(zhǔn)×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(V1×Cpr)=0.5×(A3-A1)÷
(A2-A1)÷Cpr。
2、按樣本鮮重計(jì)算
葡萄糖含量(μmol/g 鮮重)= (C標(biāo)準(zhǔn)×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2)=0.5×(A3-A1)÷
(A2-A1)÷W
3、按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算
葡萄糖含量(μmol/ 104 cell)= (C標(biāo)準(zhǔn)×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(500×V1÷V2)=0.001×(A3-A1)÷
(A2-A1)
C標(biāo)準(zhǔn):標(biāo)準(zhǔn)管濃度,0.5μmol/mL;V1:加入樣本體積,0.1mL;V2:加入提取液體積,1mL; Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本鮮重,g;500:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),500萬(wàn)。
注意:
1、最低檢測(cè)限為50nmol/g鮮重或0.5nmol/mg prot
2、若樣本中存在葡萄糖氧化酶抑制劑,則會(huì)造成測(cè)定結(jié)果偏低,建議改用HPLC法測(cè)定。
多酚氧化酶(PPO)試劑盒
脯氨酸(PRO)含量試劑盒
DPPH清除能力試劑盒
超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒-NBT法
抗脂質(zhì)過(guò)氧化能力/LPO抑制率測(cè)定試劑盒
超氧陰離子自由基清除能力試劑盒(鄰苯三酚法)
總抗氧化能力(T-AOC)試劑盒(FRAP法)
在線詢價(jià)
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