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ELISA檢測(cè)血清的詳細(xì)留意事項(xiàng)
大部分elisa檢測(cè)均以血清為標(biāo)本。血清標(biāo)本可按慣例方法收集，應(yīng)留意防止溶血，紅細(xì)胞溶解時(shí)會(huì)釋放出具有過氧化物酶活性的物質(zhì)，以HRP為符號(hào)的ELISA測(cè)定中，溶血標(biāo)本可能會(huì)添加非特異性顯色。血清標(biāo)本宜在新鮮時(shí)檢測(cè)。如有細(xì)菌污染，菌體中可能含有內(nèi)源性HRP，也會(huì)發(fā)生假陽性反應(yīng)。
一般說來，在5天內(nèi)測(cè)定的血清標(biāo)本可放置于4℃。超越一周測(cè)定的需-20℃保存。凍住血清融解后，蛋白質(zhì)局部濃縮，散布不均，應(yīng)充沛混勻并防止發(fā)生氣泡?；鞚峄蛴谐练e的血清標(biāo)本應(yīng)先離心或過濾，弄清后再檢測(cè)。重復(fù)凍融會(huì)使抗體效價(jià)下跌，所以測(cè)抗體的血清標(biāo)本如需保存作屢次檢測(cè)，宜少量分裝冰存。保存血清自收集時(shí)就應(yīng)留意無菌操作，也可參加適當(dāng)防腐劑。
ELISA試劑盒檢測(cè)血清的詳細(xì)留意事項(xiàng)：
1) 要留意防止呈現(xiàn)嚴(yán)峻溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團(tuán)，其有類似過氧化物的活性，因而，在以HRP為符號(hào)酶的ELISA測(cè)定中，如血清標(biāo)本中血紅蛋白濃度較高，則其就很簡單在溫育過程中吸附于固相，然后與后邊參加的HRP底物反應(yīng)顯色。
2) 冰凍保存的血清標(biāo)本須留意防止因停電等形成的重復(fù)凍融。標(biāo)本的重復(fù)凍融所發(fā)生的機(jī)械剪切力將對(duì)標(biāo)本中的蛋白等分子發(fā)生損壞效果，然后引起假陰性結(jié)果。此外，凍融標(biāo)本的混勻亦應(yīng)留意，不要進(jìn)行劇烈振蕩，重復(fù)倒置混勻即可。
3) 標(biāo)本在保存中如呈現(xiàn)細(xì)菌污染所造成的的混濁或絮狀物時(shí)，應(yīng)離心沉積后取上清檢測(cè)。
4) 樣本的收集及血清別離中要留意盡量防止細(xì)菌污染，一則細(xì)菌的成長，其所分泌的一些酶可能會(huì)對(duì)抗原抗體等蛋白發(fā)生分化效果;二則一些細(xì)菌的內(nèi)源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會(huì)對(duì)用相應(yīng)酶作符號(hào)的測(cè)定方法發(fā)生非特異性攪擾。
5) 血清標(biāo)本如是以無菌操作別離，則可以在2～8℃下保存一周，如為有菌操作，則主張冰凍保存。樣本的長期保存，應(yīng)在-70℃以下。
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