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ELISA所需的對照樣品總結(jié)
做ELISA實驗需要哪些對照樣品？相信還有很多小伙伴不是很清楚，今天恒遠(yuǎn)小編就給大家總結(jié)一下，ELISA所需的對照樣品都有哪些吧。
1.陽性對照
可使用已知含有目標(biāo)蛋白的內(nèi)源性可溶樣品，或已知含有檢測抗體免疫原的純化蛋白或多肽來作為陽性對照。當(dāng)樣品的檢測結(jié)果為陰性時，陽性對照的陽性結(jié)果可表明實驗過程無誤且有效，所以實驗的陰性結(jié)果是真實的。
2.陰性對照
陰性對照指的是已知不表達目標(biāo)蛋白的樣品。其有助于檢測非特異性結(jié)合和假陽性結(jié)果。為驗證結(jié)果，您使用的每個微孔板均應(yīng)包含一份陰性對照樣品。
3.標(biāo)準(zhǔn)品
標(biāo)準(zhǔn)品是一種含有已知濃度的目標(biāo)蛋白的樣品，可從中獲得標(biāo)準(zhǔn)曲線。例如，以下是我們的小鼠 IL-6 ELISA 試劑盒的典型標(biāo)準(zhǔn)曲線，濃度范圍為 15.6 至 500 pg/mL。標(biāo)準(zhǔn)曲線不佳意味著抗體未正確結(jié)合或未捕獲蛋白標(biāo)準(zhǔn)品。趨勢線的 R2 值應(yīng) > 0.99。
4.樣本基質(zhì)（加標(biāo)對照品）對照中的標(biāo)準(zhǔn)品
在 ELISA 中檢測血清樣品時，按照慣例標(biāo)準(zhǔn)品用正常稀釋緩沖液來稀釋。但我們建議您同時用檢測的種屬血清來稀釋標(biāo)準(zhǔn)品。然后可以將兩者進行比較，以確保血清中的其他蛋白質(zhì)對標(biāo)準(zhǔn)曲線沒有影響。這就是所謂的加標(biāo)對照，并可表明目標(biāo)蛋白在加入基質(zhì)后的回收率。可接受的結(jié)果為 80%-120%。
5.內(nèi)源性陽性對照
如果您正在檢測重組蛋白樣品，我們建議您納入內(nèi)源性陽性對照。這應(yīng)該是您實驗的一個必要部分。重組蛋白的抗體檢測存在一些固有的困難，需要考慮到重組蛋白的折疊可能與內(nèi)源性天然蛋白的結(jié)構(gòu)不同，并可能阻止抗體結(jié)合表位。標(biāo)簽蛋白的情況尤其如此，所以建議確保標(biāo)簽位于重組蛋白的N端或C端。
最重要的是，務(wù)必確保重組蛋白中包括您所使用的抗體的免疫原序列。內(nèi)源性陽性對照對驗證實驗結(jié)果，以及說明試劑（例如抗體）和實驗過程的有效性，起到重要作用。
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