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恒遠(yuǎn)生物|人羊膜細(xì)胞(WISH)培養(yǎng)建議
品牌: 恒遠(yuǎn)生物
貨號(hào): HYCC10347
中文名稱: 人羊膜細(xì)胞；WISH
規(guī)格: T25
形態(tài)特性: 上皮細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性: 貼壁生長(zhǎng)
特征特性: 最初以為這株細(xì)胞的起源是正常羊膜，但隨后通過同工酶分析、HeLa標(biāo)記染色體和DNA指紋法分析，證實(shí)該細(xì)胞是HeLa細(xì)胞污染的；角蛋白陽(yáng)性。
培養(yǎng)條件: DMEM-H: Dulbecco＇s Modified Eagle＇s Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS
傳代方法: 1：2~1:4傳代，每周2~3次。
凍存條件: 無(wú)血清細(xì)胞凍存液
一、細(xì)胞收到后處理
細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿完全培養(yǎng)液并封好瓶口是細(xì)胞運(yùn)輸?shù)某Ｒ娹k法。收到細(xì)胞回到自己的實(shí)驗(yàn)室后，先打開外包裝，用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超凈臺(tái)內(nèi)，嚴(yán)格無(wú)菌操作，培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)。鏡下觀察：未超過80%匯合度時(shí)，可將瓶裝的完全培養(yǎng)液收集至離心管中，加入6ml完全培養(yǎng)基，放入37℃、孵箱培養(yǎng)；超過80%匯合度時(shí)，根據(jù)情況傳代或者凍存，具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。（注意發(fā)貨的是密封培養(yǎng)瓶的話，處理完后放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)記得培養(yǎng)瓶蓋子擰松，傳代后建議一瓶用原瓶里面的完全培養(yǎng)基，另外一瓶用自己配的完全培養(yǎng)基），若是5%CO2的培養(yǎng)箱，可用密封培養(yǎng)瓶，擰緊瓶蓋后放入5%CO2培養(yǎng)箱，48H內(nèi)要換液一次。
二、細(xì)胞培養(yǎng)常見問題解答
1.培養(yǎng)基為什么一般都是偏紅色?
因?yàn)榕囵B(yǎng)基加了酚紅來(lái)顯示顏色，指示pH范圍為6-8，顏色會(huì)由黃變?yōu)樽霞t。這是為了我們能更直觀觀察培養(yǎng)液的變化，如變黃，則代表偏酸，偏堿性了就顯示偏紫色。一般來(lái)說(shuō)，細(xì)胞吸收營(yíng)養(yǎng)后，變黃后就暗示我們要換培養(yǎng)基啦!所以密切觀察很重要哦!
2.細(xì)胞的居住環(huán)境
舒適無(wú)菌的環(huán)境是細(xì)胞健康生活的重要基礎(chǔ)。如下圖為培養(yǎng)細(xì)胞的器皿，包括形狀、規(guī)格、用途多樣的培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿及培養(yǎng)板。最終住進(jìn)37℃，5%CO2的恒溫培養(yǎng)箱。
3.細(xì)胞培養(yǎng)皿和培養(yǎng)瓶區(qū)別?
就細(xì)胞培養(yǎng)狀態(tài)來(lái)說(shuō)，培養(yǎng)瓶和培養(yǎng)皿沒有太大區(qū)別，主要在于安全系數(shù)(培養(yǎng)瓶>培養(yǎng)皿)、培養(yǎng)細(xì)胞數(shù)量(大培養(yǎng)瓶>培養(yǎng)皿)。但是培養(yǎng)瓶成本也會(huì)相對(duì)較高，因此無(wú)特殊要求，一般選擇培養(yǎng)皿即可。
4.為什么細(xì)胞復(fù)蘇后，很多難以貼壁?
忽略培養(yǎng)基的問題，主要考慮細(xì)胞凍存時(shí)狀態(tài)差或者復(fù)蘇時(shí)動(dòng)作太慢導(dǎo)致細(xì)胞死亡。切記最重要的融化速度要快，可不時(shí)搖動(dòng)冷凍管，使之盡快通過最易受損的溫度段(-5～0℃)。
5.細(xì)胞凍存時(shí)對(duì)細(xì)胞量有要求嗎?
細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)會(huì)有一定的細(xì)胞死亡，因此細(xì)胞的濃度應(yīng)足夠高，起始濃度106—107個(gè)/ml/管。
6.細(xì)胞污染怎么辦?
如發(fā)現(xiàn)細(xì)胞有污染，一般建議丟棄。如果細(xì)胞非常寶貴，可試著加入含抗生素的培養(yǎng)基反復(fù)清洗，并用抗生素含量高的培養(yǎng)基培養(yǎng)，并經(jīng)常更換培養(yǎng)基。
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