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技術(shù)干貨|ELISA樣本值偏低是什么原因?
想要做好ELISA實(shí)驗(yàn)不是一件容易的事，一個(gè)不小心，實(shí)驗(yàn)結(jié)果就會(huì)出現(xiàn)偏差。近期很多顧客向我們咨詢(xún)，ELISA 實(shí)驗(yàn)中，經(jīng)常會(huì)遇到樣本值偏低的問(wèn)題，樣本類(lèi)型包括血清、 血漿、組織勻漿、細(xì)胞裂解液等。下面是小編為大家總結(jié)的一些原因，一起來(lái)學(xué)習(xí)下吧！
1.樣本本身含量可以被檢測(cè)，有哪些原因?qū)е聹y(cè)值低呢？
1）試劑盒的保存
試劑盒要按照規(guī)定的方法保存，大家在購(gòu)買(mǎi)試劑盒時(shí)請(qǐng)務(wù)必留心試劑盒不同組分的保存方法。
2）樣本上樣前的準(zhǔn)備
這個(gè)過(guò)程包括樣本的制備、保存以及是否有經(jīng)歷過(guò)反復(fù)凍融。樣本的制備要根據(jù)樣本類(lèi)型采用不同的方法，血清、血漿與細(xì)胞裂解液的制備方法均不同。 保存，包括保存溫度以及保存時(shí)間。一般推薦樣本制備后進(jìn)行分裝后儲(chǔ)存在-20 度或-80 度，儲(chǔ)存時(shí)間不宜過(guò)久，因?yàn)殚L(zhǎng)時(shí)間的儲(chǔ)存有可能導(dǎo)致目標(biāo)蛋白的降解，致使檢測(cè)結(jié)果不理想。最后注意不要反復(fù)凍融，蛋白樣本反復(fù)凍融會(huì)導(dǎo)致降解發(fā)生。
3）稀釋方案
樣本的稀釋對(duì)于實(shí)驗(yàn)的成功至關(guān)重要，稀釋過(guò)度以及稀釋不足均有可能導(dǎo)致樣本的測(cè)值低。
稀釋過(guò)度：一般情況下客戶(hù)都會(huì)根據(jù)文獻(xiàn)測(cè)值，以及檢測(cè)范圍估計(jì)一個(gè)稀釋倍數(shù)，恒遠(yuǎn)生物的試劑盒在出廠之前也會(huì)做大量檢測(cè)，對(duì)于常規(guī)樣本如血清血漿，我們也會(huì)根據(jù)實(shí)驗(yàn)室樣本測(cè)值情況推薦一個(gè)稀釋倍數(shù)。但實(shí)驗(yàn)者如果直接按照估計(jì)或推測(cè)的稀釋倍數(shù)進(jìn)行稀釋檢測(cè)后，發(fā)現(xiàn)樣本OD非常低。這是由于文獻(xiàn)作者用的樣本，樣本會(huì)存在一定的差異，這些測(cè)值有一定的參考意義，但如果照搬，可能會(huì)導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗。
稀釋倍數(shù)不夠：鉤狀效應(yīng)，Elisa 實(shí)驗(yàn)中發(fā)生鉤狀效應(yīng)主要是當(dāng)抗原與抗體比例不合適而導(dǎo)致假陰性的現(xiàn)象，抗原過(guò)量稱(chēng)為后帶效應(yīng)。當(dāng)樣本中目標(biāo)物含量很高，而沒(méi)有進(jìn)行正確的稀釋?zhuān)陀锌赡軙?huì)導(dǎo)致假陰性反應(yīng)。解決方案依舊同稀釋過(guò)度的解決方案一樣，在正式實(shí)驗(yàn)之前做預(yù)實(shí)驗(yàn)。
2.分析物在樣品中本身濃度偏低
很多時(shí)候，實(shí)驗(yàn)操作沒(méi)有問(wèn)題，標(biāo)準(zhǔn)曲線良好，但檢測(cè)多次樣本依然不在檢測(cè)范圍。像細(xì)胞因子，如 IL-6 需在炎癥刺激情況才會(huì)大量產(chǎn)生，一般非炎癥樣本測(cè)值會(huì)非常低。針對(duì)這種測(cè)值比較低的情況，一般建議根據(jù)文獻(xiàn)選取適合的樣本類(lèi)型，同時(shí)可以選用高靈敏度的試劑盒，恒遠(yuǎn)生物針對(duì)某些容易出現(xiàn)測(cè)值低的指標(biāo)都有研發(fā)出高靈敏度的試劑盒，如IL-6 等。
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