標準曲線的繪制
標準曲線的繪制方法
可以采用各種繪圖軟件來繪制ELISA標準曲線,下面以“Curve Expert1.4”軟件為例,繪制ELISA標準曲線的方法如下;
1.啟動“Curve Expert”
(點擊下載Curve Expert1.3.zip 或下載升級版Curve Expert1.4.zip)
2.X軸輸入標準品的OD值,Y軸輸入所對應的濃度值,如圖:
3.單擊[運行] 按鈕,出現(xiàn)如下對話框
4.單擊[ok]按鈕,出現(xiàn)如下兩個對話框,關閉下面一個對話框
5. 在對話框的右上角出現(xiàn)一些曲線的名稱,從“1”開始依次點擊曲線名稱,在右下角會出現(xiàn)相應擬合的曲線。
6. 根據(jù)擬合的曲線選取ELISA擬合度最佳的曲線雙擊,出現(xiàn)如下對話框:
注意:選擇系數(shù)(即“r”值)最好的曲線方程來進行運算。在下面的對話框
右上角有“r”值 ,當“r”值越接近1擬合度越好
7.按[Ctrl]鍵+[L]鍵,出現(xiàn)如下對話框:
8.輸入標準的OD值,單擊[Calculate]按忸,即可得到待測蛋白的實際含量(標本稀釋了N倍,運算出的數(shù)值應在乘以N)。
9. 如想得到ELISA擬合曲線的方程,可在步驟6的對話框空白處右擊,選擇”Information”
10. 得到如下對話框:點擊“Copy”
在你需要的位置粘貼即可得到如下數(shù)據(jù):
Rational Function: y=(a+bx)/(1+cx+dx^2)
Coefficient Data:
a = -21.531017
b = 212.05019
c = -0.24054479
d = 0.018060778